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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
- Occlusion de l’artère cérébrale moyenne (MCAO) :
- Placez et fixez la souris anesthésiée (avec une sonde de flowmétrie laser Doppler (LDF) attachée à son crâne) en position couchée et maintenez sa température corporelle à l’aide d’une lampe chauffante tout au long de la chirurgie. Désinfectez le cou avec de l’alcool éthylique à 70 %.
- Faites une incision cutanée paramédiane dans le cou à l’aide d’un scalpel ; disséquez les tissus mous avec une pince pour exposer les vaisseaux. Ajoutez une goutte de solution saline aux tissus exposés pour les garder hydratés.
- Disséquez l’artère carotide commune des tissus environnants et du nerf vague à l’aide d’une pince ophtalmique. Veillez à ne pas endommager le nerf vague. Désinfectez à nouveau la peau du cou avec de l’iodophore après l’exposition de l’artère carotide commune.
- Placez une pince à microvaisseaux à l’extrémité distale de l’artère carotide commune, puis faites un nœud mort avec des sutures en soie 6-0 à l’extrémité proximale. Placez la pince aussi proximale que possible pour les opérations ultérieures. Assurez-vous que la longueur du récipient entre la pince et le nœud mort est aussi longue que possible pour les opérations ultérieures.
- Faites une suture temporaire à proximité de la pince en faisant un nœud lâche. Assurez-vous qu’il y a suffisamment d’espace entre deux nœuds pour l’insertion du monofilament.
- Faites une petite incision longitudinale entre les deux nœuds avec des ciseaux micro-ophtalmiques. Assurez-vous que l’incision est aussi proche que possible du nœud mort pour les opérations ultérieures. Veillez à ne pas couper le récipient.
- Insérez un monofilament de 12 mm à travers l’incision pour entrer dans la lumière de l’artère et avancez-le de quelques mm. Serrez le nœud lâche autour de l’extrémité du monofilament, puis retirez la pince.
- Faites avancer le filament dans l’artère carotide interne (10 mm pour obstruer l’artère cérébrale moyenne) avec une pince ophtalmique jusqu’à ce que le logiciel LDF montre une forte baisse (réduction de >80 % par rapport au débit sanguin de base) du flux sanguin. Enregistrez l’heure de début de l’occlusion.
- Occlusion de l’artère cérébrale moyenne pendant 1 h. Coupez la sonde LDF et placez les souris dans un incubateur à 30 °C pendant la durée de l’occlusion.
- Reperfusion et post-conditionnement acide (APC) :
- Anesthésie à nouveau les animaux avec de l’isoflurane comme décrit ci-dessus, 55 min après l’heure de début de l’occlusion. Placez et fixez les souris en position couchée. Ouvrez l’incision du cou et réexposez l’artère carotide commune.
- Tirez doucement sur le filament à l’aide d’une pince ophtalmique après la période d’occlusion pour obtenir une reperfusion et transformez la suture temporaire en une suture permanente en resserrant le nœud.
- Pour le traitement de l’acidose, changez le gaz inhalé par le cône nasal en un mélange de gaz contenant 20 % de CO2, 20 % d’O2 et 60 % de N2 pendant 5 min à 5, 50 ou 100 min après la reperfusion. Fermez l’incision avec une suture chirurgicale interrompue.
- Placez les souris dans une cage chauffante à 30 °C jusqu’à ce qu’elles reprennent conscience, puis ramenez-les dans des cages individuelles propres. Fournissez aux souris une boîte de Pétri remplie d’eau et de nourriture humidifiée. Surveillez de près les souris après la chirurgie pour détecter une douleur excessive et la mort.